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影響酶促反應(yīng)的因素:溫度、PH及抑制劑作用
酶作為生物催化劑與一般催化劑一樣呈現(xiàn)溫度效應(yīng)。酶促反應(yīng)開(kāi)始時(shí)，反應(yīng)速度隨溫度升高增快。達(dá)到最大反應(yīng)速度時(shí)的溫度稱(chēng)為某種酶的最適溫度。由于絕大多數(shù)酶是又活性的蛋白質(zhì)，當(dāng)達(dá)到最適溫度后，繼續(xù)升高溫度，引起蛋白質(zhì)變性，酶促反應(yīng)速度反而逐步下降，以致停止。
酶的最適溫度不是一個(gè)常數(shù)，與作用時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)。測(cè)定酶活性均在酶促反應(yīng)最適溫度下進(jìn)行。大多數(shù)動(dòng)物來(lái)源的酶最適溫度為37-40℃，植物來(lái)源的酶最適溫度為50-60℃。
酶的催化活性與環(huán)境PH有密切關(guān)系，通常各種酶只在一定PH范圍內(nèi)具有活性，酶活性最高時(shí)的PH，稱(chēng)為酶的最適PH。高于或低于此PH時(shí)酶的活性逐漸降低。
酶的最適PH不是一個(gè)特征物理常數(shù)，對(duì)于同一個(gè)酶，其最適PH因緩沖液和底物的性質(zhì)不同而又差異。
在酶促反應(yīng)過(guò)程中，抑制對(duì)酶的抑制作用可分為可逆抑制和不可逆抑制。可逆抑制有根據(jù)抑制劑和底物的關(guān)系分為三種類(lèi)型;競(jìng)爭(zhēng)性抑制，非競(jìng)爭(zhēng)性抑制和反競(jìng)爭(zhēng)性抑制。
實(shí)例如下：
一、試劑
5%三氯醋酸溶液。1mmol/L苯甲脒;稱(chēng)取19.25g苯甲脒，用少量水溶解，定容至100ml。
1%酪蛋白溶液;取1g酪蛋白，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml、水40ml，置60℃水浴加入至溶解，放置室溫后，加水稀釋成100ml，并調(diào)至PH8.0.
0.1mol/L硼酸緩沖液;
A液，0.1mol/L硼酸(H2BO3);稱(chēng)取6.18gH3BO3溶于1000mL水中。
B液，0.025mol/L硼砂(Na2B4O7·10H2O);
稱(chēng)取9.54g硼砂(Na2B4O7·10H2O)溶液1000ml水中。
PH7.4硼酸緩沖液;90ml A液+10ml B液
PH8.0硼酸緩沖液;70ml A液+30ml B液
PH9.0硼酸緩沖液;20ml A液+80ml B液、
材料
酪蛋白酶溶液：50-200ug/ml，用0.1mol/L,PH8.0硼酸緩沖液配制。可用粗提的豬胰蛋白酶，用量根據(jù)實(shí)際測(cè)得比活值而定。
儀器：
試管1.5cm x15cm(x19);移液管1ml(x7)，2mL(x3)，5mL(x5);量筒100mL(x1)，恒溫水浴(0℃);白瓷板;膠頭滴管。
操作方法;
溫度對(duì)酶活力的影響
取3只試管，按下表操作;
空白管;現(xiàn)在試管中加入1.0mL 1%酪蛋白溶液和3.0mL 5%三率醋酸溶液，搖勻后，再加入0.2ml酶液，0.8mL蒸餾水，在37℃保溫10min。
將樣品管和空白管分別離心，3000r/min，5分鐘，取上清液于280nm處測(cè)定各管的吸光值，并比較之。
Ph對(duì)酶活力的影響
取3支試管按下表操作;
空白管;現(xiàn)在試管中加入1.0ml1%酪蛋白溶液和3.0ml5%三氯醋酸溶液，搖勻后，在加入0.2ml酶液，0.8ml蒸餾水，在37℃保溫10min。
將樣品管和空白管分別離心，3000r/min，5分鐘，取上清液于280nm處測(cè)定各管的吸光值，并比較值。
抑制劑對(duì)酶活力的影響
取3之試管，按下表操作;
空白管;現(xiàn)在試管中加入1.0mL1%酪蛋白溶液和3.0mL5%三氯酸溶液，搖勻后，再加入0.2mL酶液，0.8mL蒸餾水，在37℃保溫10min。
將樣品管和空白管分別離心，3000r/min，5分鐘，取上清液于280nm處測(cè)定各管的吸光值，并比較之。
注意事項(xiàng);
1、由于胰蛋白酶活力不同，因此實(shí)驗(yàn)應(yīng)隨時(shí)檢查反應(yīng)進(jìn)行情況。如反應(yīng)進(jìn)行的太快，應(yīng)適當(dāng)稀釋酶液;則應(yīng)減少酶溶液的稀釋倍數(shù)。
2、注意不要在檢查反應(yīng)程度時(shí)使各管溶液混雜。
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