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?大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒實驗使用說明書主要包括試劑的保存、試劑的準(zhǔn)備、操作流程及注意事項等部分?。
試劑的保存
試劑盒應(yīng)保存在-20℃(較長時間不用時)或2-8℃(頻繁使用時)?。
濃洗滌液低溫保存時可能會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶?。
試劑的準(zhǔn)備
試劑應(yīng)按說明儲存，用前恢復(fù)到室溫。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存?3。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器?。
用干凈的塑料容器配置洗滌液，用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?。
操作流程
待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl?。
酶標(biāo)板置4℃，包被過夜?1。
洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液洗滌3-4次?。
陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的抗體工作液50μl(具體抗體根據(jù)實驗需求選擇)?。
酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min?。
再次洗板?。
加入底物，反應(yīng)后加終止液，用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)濃度?。
注意事項
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)?。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好，保質(zhì)前使用。不同批號的試劑不要混用?3。
洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水?。
底物A易揮發(fā)，避免長時間打開蓋子;底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下，且有毒，實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值?。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣?。
請嚴(yán)格按照說明書操作，以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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