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大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒的實驗使用說明書如下：
1. 實驗目的
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的含量?。
2. 實驗原理
采用雙抗體夾心法測定標本中大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)水平。用純化的大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，依次加入標本、標準品及HRP標記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色，TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中的巨噬細胞移動抑制因子(MIF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品濃度?。
3. 試劑盒組成
封板膜：2片
說明書：1份
密封袋：1個
標準品：2700ng/L，0.5ml×1瓶
酶標包被板：1×48或1×96
樣品稀釋液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
顯色劑A液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
顯色劑B液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
終止液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
濃縮洗滌液：(20ml×20倍)×1瓶或(20ml×30倍)×1瓶?。
4. 樣本處理及要求
血清?：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，收集上清?。
血漿?：使用EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后離心，收集上清?。
尿液?：無菌管收集，離心后取上清?。
細胞培養(yǎng)上清?：檢測分泌性成分時，直接收集上清;檢測細胞內(nèi)成分時，需反復凍融細胞懸液后離心?。
組織標本?：切割后稱重，加入PBS勻漿，離心后取上清?。
5. 實驗步驟
將標準品、標本依次加入包被微孔板中，溫育并洗滌?。
加入HRP標記的檢測抗體，溫育并洗滌?。
加入底物TMB顯色，反應終止后測定吸光度(OD值)?。
根據(jù)標準曲線計算樣品濃度?。
6. 注意事項
試劑盒需在-20℃保存，開封后酶標板需密封保存?。
標本采集后應盡快檢測，避免反復凍融?。
實驗操作需在相同環(huán)境條件下進行，以減少誤差?。
7. 結(jié)果計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線，根據(jù)樣品的OD值計算濃度，再乘以稀釋倍數(shù)?。
以上為實驗使用說明書的詳細內(nèi)容，供參考?。
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