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以下是關(guān)于人促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明：
BS-10009 人促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
雙抗體夾心法?：采用包被抗人EPO抗體的微孔板捕獲樣本中的EPO，再通過(guò)酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物，經(jīng)顯色反應(yīng)測(cè)定濃度。
顯色機(jī)制?：底物TMB在過(guò)氧化物酶催化下顯藍(lán)色，終止后轉(zhuǎn)為黃色，OD值與EPO濃度成正比。
二、試劑盒組成
標(biāo)準(zhǔn)品?：需用蒸餾水稀釋至400mIU/mL，梯度稀釋后使用。
酶標(biāo)試劑?：HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體。
洗滌液/終止液?：濃縮洗滌液需20倍稀釋?zhuān)K止液為硫酸溶液。
三、樣本處理
血清/血漿?：室溫靜置后離心取上清，避免反復(fù)凍融。
組織勻漿?：PBS沖洗后勻漿，離心取上清。
細(xì)胞培養(yǎng)上清?：直接離心后檢測(cè)。
四、操作步驟
加樣?：空白孔加稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔各加100μL，37℃孵育2小時(shí)。
洗滌?：棄液體后加檢測(cè)抗體A/B工作液，分別孵育1小時(shí)，洗滌3-5次。
顯色?：加TMB底物避光反應(yīng)15-30分鐘，終止后450nm測(cè)OD值。
五、注意事項(xiàng)
預(yù)實(shí)驗(yàn)?：建議使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化條件。
時(shí)間控制?：加樣間隔不超過(guò)10分鐘，避免孵育時(shí)間差異。
保存?：試劑2-8℃保存，樣本-20℃以下凍存。
六、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過(guò)回歸方程計(jì)算。
如需更詳細(xì)的步驟圖示或特殊樣本處理方法，可參考試劑盒附帶的完整說(shuō)明書(shū)。
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