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以下是關(guān)于人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合指南：
BS-10001 人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法，通過(guò)預(yù)包被在酶標(biāo)板上的抗VEGF抗體捕獲樣本中的VEGF，再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后測(cè)定OD值，濃度與顏色深淺成正比。
二、試劑盒組成
核心組分?：預(yù)包被酶標(biāo)板(96孔)、標(biāo)準(zhǔn)品(40ng/瓶)、HRP標(biāo)記抗體、TMB底物、終止液
輔助溶液?：20×濃縮洗滌液(需1:20稀釋)、10×標(biāo)本稀釋液(需1:10稀釋)
三、樣本處理
血清/血漿?：3000rpm離心10-30分鐘，避免反復(fù)凍融
細(xì)胞上清?：離心去除顆粒物，分裝保存于-20℃
組織勻漿?：生理鹽水搗碎后離心取上清
四、標(biāo)準(zhǔn)品配制
標(biāo)準(zhǔn)品用1ml蒸餾水復(fù)溶(40ng/ml)
梯度稀釋：依次進(jìn)行對(duì)倍稀釋(62.5-2000pg/mL)
五、實(shí)驗(yàn)步驟
加樣?：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL，37℃溫育2小時(shí)
洗滌?：手工洗板需浸泡1-2分鐘，重復(fù)3-5次，拍干
顯色?：
加TMB底物90μL，避光反應(yīng)15-25分鐘
終止反應(yīng)后立即測(cè)定450nm OD值
六、注意事項(xiàng)
保存條件?：試劑盒2-8℃保存，使用前室溫平衡60分鐘
交叉污染?：使用一次性吸頭，避免金屬接觸終止液
質(zhì)量控制?：板內(nèi)變異系數(shù)<10%，板間<15%
七、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，通過(guò)回歸方程計(jì)算樣本濃度。
注：本試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
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