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植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-7929 植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒
以下是植物ATP酶(ATPase)ELISA試劑盒的實驗使用說明書綜合指南：
一、檢測原理
采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)：
微孔板預包被ATP酶抗體，依次加入樣本、標準品和HRP標記檢測抗體
經溫育洗滌后，TMB底物在過氧化物酶催化下顯色(藍→黃)，顏色深度與ATP酶濃度正相關
用酶標儀在450nm波長測定OD值，計算樣品活性或濃度
二、樣本處理要求
樣本類型 處理方法
血清/血漿 采集后1000×g離心15-20分鐘，避免使用含NaN3的抗凝劑(抑制HRP活性)
植物組織 勻漿后1000×g離心20分鐘取上清，分裝凍存于-20℃(避免反復凍融)
細胞上清液 1000×g離心10分鐘去除顆粒
三、關鍵操作步驟
試劑準備?：
凍干標準品需用稀釋液復溶
洗滌液按1:25用蒸餾水稀釋
加樣順序?：
空白孔→標準品孔→樣本孔
每孔依次加入樣本/標準品→檢測抗體→酶結合物
溫育條件?：
37℃避光反應30分鐘，嚴格計時
終止反應?：
加入終止液(2N H?SO?)后立即測定
四、注意事項
避免底物TMB接觸金屬器械，使用塑料吸頭加樣
不同批號試劑不可混用，未用完板條需密封防潮
顯色后若孔內出現沉淀，需重新離心后測定
實驗需設置復孔，CV值應<15%
五、存儲與有效期
未開封試劑盒：2-8℃保存(部分組分需-20℃)
有效期通常為6個月，復溶后標準品不可重復使用
注：本試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷。具體操作參數請以實際試劑盒說明書為準。
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