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人白細(xì)胞介素21(IL-21)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)
BS-1648人白細(xì)胞介素21(IL-21)ELISA試劑盒
以下是關(guān)于人白細(xì)胞介素21(IL-21)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明：
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法檢測(cè)樣本中IL-21濃度?。預(yù)包被的捕獲抗體與樣本中IL-21結(jié)合后，再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成復(fù)合物，通過(guò)TMB顯色反應(yīng)(藍(lán)色→黃色)測(cè)定450nm吸光度，顏色深淺與IL-21濃度正相關(guān)?。
二、試劑盒組成
預(yù)包被板?：96孔或48孔(2-8℃保存)?
標(biāo)準(zhǔn)品?：濃度通常為0-320pg/mL或360ng/L(需稀釋)?
檢測(cè)抗體?：生物素化抗體工作液?
顯色系統(tǒng)?：TMB底物A/B液、終止液?
洗滌液?：20-30倍濃縮液(使用前需稀釋)?
三、樣本處理
血清/血漿?：
血清：室溫凝固10-20分鐘后，2000-3000×g離心20分鐘?
血漿：EDTA/肝素抗凝，3000×g離心15-30分鐘?
避免反復(fù)凍融，-20℃分裝保存?
細(xì)胞上清/組織勻漿?：
細(xì)胞上清：3000×g離心10分鐘?
組織勻漿：PBS勻漿后5000×g離心5-10分鐘?
四、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說(shuō)明書(shū)梯度稀釋(如0-320pg/mL)?
加樣孵育?：
每孔加100μL樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，37℃孵育90分鐘?
洗滌?：手工洗板5次(每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩干)?
抗體孵育?：
加入生物素化抗體工作液100μL，37℃孵育60分鐘?
酶結(jié)合物?：
加入HRP標(biāo)記抗體100μL，37℃孵育30分鐘?
顯色?：
加TMB底物100μL，避光顯色15分鐘?
終止與檢測(cè)?：
加終止液100μL，3分鐘內(nèi)測(cè)定OD450值?
五、注意事項(xiàng)
試劑保存?：
未開(kāi)封試劑盒2-8℃保存，開(kāi)封后板條需密封防潮?
顯色劑B需避光，終止液含強(qiáng)酸需謹(jǐn)慎操作?
質(zhì)量控制?：
每次實(shí)驗(yàn)需包含空白孔(僅加稀釋液)?
板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)
注：以上資料僅供參考，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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