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小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒實驗說明書
BS-2378小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒
實驗原理
采用雙抗體夾心法，通過預(yù)包被抗15-LOX單抗捕獲樣本中的目標(biāo)蛋白，再與生物素標(biāo)記的二抗結(jié)合形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后測定450nm吸光度，濃度與OD值呈正相關(guān)。
試劑盒組成
組分48T規(guī)格96T規(guī)格保存條件
預(yù)包被酶標(biāo)板8×6條8×12條2-8℃
標(biāo)準(zhǔn)品0.5mL(0-10ng/mL)0.5mL(0-10ng/mL)-20℃
生物素化檢測抗體60μL(100×)120μL(100×)2-8℃
TMB顯色液(A/B)各3mL各6mL避光2-8℃
20×濃縮洗滌液30mL60mL室溫
樣本處理要求
血清/血漿：
使用EDTA抗凝管采集，2000-3000rpm離心20分鐘，避免溶血。
短期保存于2-8℃(≤48小時)，長期需-20℃分裝，避免反復(fù)凍融。
組織勻漿：
按1:9比例加入PBS(pH7.4)，機械勻漿后離心取上清。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：取7支EP管，按1:2比例稀釋至0.156-10ng/mL。
加樣孵育：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃孵育90分鐘。
洗滌顯色：棄液后加入生物素化抗體，37℃孵育60分鐘，TMB避光顯色15分鐘。
終止檢測：加入終止液后30分鐘內(nèi)讀取450nm吸光度。
結(jié)果分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合：推薦四參數(shù)邏輯回歸(R2>0.99) 。
靈敏度：0.156ng/mL，線性范圍0.156-10ng/mL。
注意事項
顯色液需避光保存，避免金屬離子污染。
濃縮洗滌液需用蒸餾水1:20稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。
高脂樣本需離心去除懸浮物，避免假陽性。
注意：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒
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